Diagnosis to detect porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV) by optical and transmission electron microscopy techniques / Diagnóstico para detectar el virus de la gastroenteritis porcina transmisible por técnicas de microscopía óptica y electrónica de transmisión

The porcine transmissible gastroenteritis is a highly severe contagious disease, caused by virus of the Coronaviridae family, genus Coronavirus. Its epizootic shape can reach a rate of up to 100 percent mortality in piglets under two weeks of age as a result of severe dehydration. In this study fragments of small intestine and stool samples were collected from 75 autopsied pigs from properties. The samples of the fragments were frozen and sent to the Laboratory of Electron Microscopy, Instituto Biológico, SP, Brazil, for histological and transmission electron microscopic analyses. According to histological H&E technique, atrophy, villous necrosis and destruction of the enterocytes were observed in 35 (46.6 percent) out of the 75 fragments of the small intestine samples. On the immunohistochemistry technique 19 (25.3 percent) fragments were positively stained with DAB in the Ag-Ac reaction (MabTGEV). In 19 (25.3 percent) positive samples analyzed by in situ hybridization, a brown stain of enterocytes was observed, mainly in the epithelial cells of the villi. By the negative staining technique, we visualized enveloped, pleomorphic coronavirus particles, with typical radial projections resembling solar corona, with 140 nm diameter in 21 samples (28 percent) of the small intestine fragments and in 16 (21.3 percent) stool samples. In the ultrathin sections of 21 (28 percent) samples of small intestine, complete coronavirus particles with 80 nm diameter were seen among the microvilli and in the cytoplasm of epithelial cells. Immature particles with 60 nm diameter, budding from cell membrane and from a rough endoplasmic reticulum and also inside the vacuoles were visualized. In 19 (25.3 percent)...

La gastroenteritis transmisible porcina se caracteriza por ser una enfermedad altamente contagiosa y aguda, causada por virus de la familia Coronaviridae, género Coronavirus. Su forma epizoótica puede alcanzar una tasa de hasta 100 percent de mortalidad en lechones con menos de dos semanas de edad, como resultado de deshidratación severa. En este trabajo se recogieron 75 fragmentos de intestino delgado y muestras de heces de 75 cerdos autopsiados. Las muestras se congelaron y se enviaron al Laboratorio de Microscopía Electrónica, del Instituto Biológico, SP, Brasil, para el análisis histológico y por microscopía electrónica de transmisión. Por la técnica histológica de H&E fue observado atrofia y necrosis de la vellosidades además de la destrucción de los enterocitos en 35 (46,6 ppor ciento) de las 75 muestras de fragmentos del intestino delgado. Por inmunohistoquímica 19 (25,3 por ciento) de los fragmentos se tiñeron positivamente por el DAB en la reacción Ag-Ac (MabTGEV). En 19 (25,3 por ciento) muestras positivas mediante hibridación in situ, se observó tinción marrón de los enterocitos, principalmente en las células epiteliales de las vellosidades. Por la técnica de coloración negativa, se observaron partículas de coronavirus, encapsuladas, pleomórficas con proyecciones radiales típicas, en forma de corona solar, midiendo alrededor de 140 nm de diámetro en 21 (28 por ciento) muestras de fragmentos del intestino delgado y en 16 (21,3 por ciento muestras de heces. En cortes ultra finos de 21 (28 por ciento) fragmentos de intestino delgado fueron visualizadas partículas de coronavirus completas con 80 nm de diámetro entre las microvellosidades y en el citoplasma de las células epiteliales y partículas inmaduras de 60 nm de diámetro brotando de las membranas celulares y del retículo endoplasmático rugoso y en el interior de las vacuolas. En 19 (25,3 por ciento)...

Avian paramyxoviruses: detection by transmission electron microscopy techniques / Paramixovirus aviario: detección por técnicas de microscopía electrónica de transmisión

Diseases caused by avian paramyxovirus (APMV) occur in commercial, captive and wild birds worldwide, demonstrating the significant economic and ecological importance of these agents. Paramyxoviruses belong to the paramyxoviridae family, paramyxovirinae subfamily and avulavirus genus. During the period 2000 to 2011, stool and small intestine samples of 1647 birds species were sent to the Laboratory of Electron Microscopy, Biological Institute of São Paulo, Brazil, for diagnosis of viral agents. The samples were processed by negative staining (rapid preparation) and resin embedding techniques. Under the transmission electron microscope by negative staining technique, in 294 (17.8 percent) samples of 1647 were visualized paramyxovirus particles pleomorphic, roughly spherical or filamentous, measuring 100 to 500 nm of diameter containing an envelope covered with spikes and characteristic helical herring-bone-like nucleocapsid measuring 15 to 20 nm in diameter. Ultrathin sections of the small intestine fragments revealed the presence of amorphous granular intracytoplasmic inclusions surrounded by membrane and containing viral nucleocapsid measuring 10-14 nm in diameter. Immature particles budding from cell membranes, pleomorphic, spherical and tubular particles containing viral nucleocapsid strands, and the complete particles measured up to 170 nm in diameter were seen in the cytoplasm. Intranuclear inclusions containing viral nucleocapsid were also visualized. Nuclei showed a marginalized chromatin.

Las enfermedades causadas por paramixovirus (APMV) ocurren mundialmente, tanto en aves de corral, en aquellas en vida libre o en cautiverio, lo que demuestra la importancia económica y ecológica de estos virus. El paramixovirus aviario pertenece a la familia paramyxoviridae, subfamilia paramyxovirinae y género avulavirus. Durante el periodo de 2000 a 2011, muestras de heces y fragmentos del intestino delgado de 1647 especies de aves han sido enviados al Laboratorio de Microscopía Electrónica, Instituto Biológico de São Paulo, para el diagnóstico de agentes virales. Las heces y fragmentos del intestino delgado, se procesaron por las técnicas de contraste negativo (preparación rápida) y la inclusión en resina. Al microscopio electrónico de transmisión mediante la técnica de contraste negativo se visualizaron en muestras de 294 aves, partículas de paramixovirus, pleomórficas, más o menos esféricas o filamentosas, de 100 a 500 nm de diámetro que contenían un sobre cubierto por púas que presentaban característica helicoidal, con nucleocapside tipo espiga, midiendo de 15 a 20 nm de diámetro. Secciones ultrafinas de los fragmentos del intestino delgado, revelaron en el citoplasma la presencia de inclusiones granulares amorfas rodeadas por una membrana, contiendo nucleocapside viral midiendo de 10-14 nm de diámetro, partículas inmaduras brotando de las membranas celulares, partículas virales tubulares, esféricas o pleomórficas que contenían filamentos nucleocapside. Estas partículas completas alcanzaban a los 170 nm de diámetro. Fueron observadas también, inclusiones intranucleares contiendo nucleocapside viral. Los núcleos mostraron una cromatina marginal.